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http://repositorioinstitucional.uea.edu.br//handle/riuea/3658
Title: | Prospecção de metabólitos de Aspergillus spp. e Penicillium spp. da coleção de fungos da Amazônia (CFAM) para atividade antimicrobiana e produção de proteases |
Other Titles: | Prospection of Aspergillus spp. and Penicillium spp. from the Amazon Fungi Collection (CFAM) for antimicrobial activity and protease production |
Authors: | D’Elia, Gigliola Mayara Ayres |
metadata.dc.contributor.advisor1: | Barbosa, Larissa Kirsch |
Keywords: | Antimicrobiano;Enzimas;Compostos químicos;Antimicrobial;Enzymes;Chemical compounds |
Issue Date: | 26-Jul-2021 |
Publisher: | Universidade do Estado do Amazonas |
Citation: | D'ELIA, Gigliola Mayara Ayres. Prospecção de metabólitos de Aspergillus spp. e Penicillium spp. da coleção de fungos da Amazônia (CFAM) para atividade antimicrobiana e produção de proteases. 2021. 42 f. TCC (Graduação em Ciências Biológicas) - Universidade do Estado do Amazonas, Manaus. |
metadata.dc.description.resumo: | A exploração de novos antibióticos naturais é um desafio que demanda tempo e elevados custos. A indústria farmacêutica tem em grande parte abandonado estes compostos em favor do grande número de moléculas sintéticas já conhecidas e descritas na literatura. Porém, os antibióticos naturais produzidos por microrganismos possuem algumas características que fazem a busca dessas moléculas necessária. São moléculas originais, com uma imensa diversidade de estruturas químicas e atividades biológicas. Sabe-se que fungos isolados de diversos substratos do bioma Amazônico são microrganismos produtores de biomoléculas com potencial terapêutico e, dentre tais fungos, podemos destacar os gêneros Aspergillus e Penicillium. Tais gêneros também são conhecidos por produzirem enzimas de interesse biotecnológico, como as proteases, que são utilizadas em diversos segmentos da indústria. Com isso, o estudo teve como objetivo avaliar o potencial antimicrobiano e proteolítico de fungos filamentosos estocados na Coleção de Fungos da Amazônia – CFAM, bem como caracterizar o perfil químico dos fungos com melhores atividades. Foram selecionadas 100 culturas fúngicas, sendo 50 de Aspergillus spp. e 50 de Penicillium spp., armazenadas na Coleção de Fungos da Amazônia – CFAM do ILMD/FIOCRUZ. A reativação das culturas foi feita conforme literatura especializada. Para obtenção dos extratos as culturas viáveis foram cultivadas em Ágar Extrato de Levedura e Sacarose (YES), a 28°C e, após sete dias, foi feita a extração a frio dos biocompostos em Acetato de Etila. Os biocompostos extraídos foram testados frente à Candida albicans CFAM 1286, Staphylococcus aureus CBAM 0324 e Escherichia coli CBAM 0002, pelo método de “cup plate” e foi feita a Concentração Mínima e Inibitória (CIM). Os extratos que apresentaram atividade foram submetidos a CIM e, os que apresentaram as menores concentrações nesta (0,156 e 0,312 mg/mL) seguiram para a caracterização do perfil químico por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) e respectivas revelações físicas (com luz UV de 254 e 365 nm), químicas (utilizando Dragendorf, Anisaldeído, Cloreto Férrico, Sulfato Cérico e NP/PEG) e biológicas (bioautografia com E. coli 0002, S. aureus 0324 e C. albicans 1286) e, também foram avaliados quanto a sua produção proteolítica onde os fragmentos dos fungos foram cultivados em solução manachini por durante 5 dias, a 28°C, onde foram possíveis os testes em “Cup plate” e leitura da produção enzimática através do espectrofotômetro. Dentre os extratos obtidos das 100 culturas fúngicas selecionadas, 64% (n=64) dos extratos apresentaram atividade positiva para pelo menos um microrganismo testado com halos de inibição variando de 2 a 30 mm de diâmetro. Na CIM, dos 64 extratos que apresentaram atividade, 24% (n=15) apresentaram atividade nas menores concentrações do estudo (0,156 e 0,312 mg/mL) e estes seguiram para a CCD, onde foi possível notar uma grande variedade de compostos encontrados. Dos 15 fungos, cinco foram perdidos por contaminação, sendo apenas dez utilizados para produção enzimática. Nos testes de “Cup plate”, apenas um filtrado fúngico não apresentou atividade. Os fungos estudados apresentaram atividade satisfatória tanto para antimicrobianos quanto para a produção de proteases, contribuindo para a melhor caracterização das espécies fúngicas da região Amazônica, especificamente os gêneros Aspergillus e Penicillium, bem como para o avanço no setor biotecnológico. Os extratos fúngicos estudados apresentaram resultados promissores, entretanto faz-se necessário testes futuros para a melhor elucidação dos compostos. PALAVRAS-CHAVE: Antimicrobiano; enzimas; compostos químicos. |
Abstract: | The exploration of new natural antibiotics is a time-consuming and high challenge. costs. The pharmaceutical industry has largely abandoned these compounds in favor of the large number of synthetic molecules already known and described in the literature. However, natural antibiotics produced by microorganisms have some features that make the search for these molecules necessary. They are original molecules, with an immense diversity of chemical structures and biological activities. it is known that fungi isolated from different substrates of the Amazon biome are microorganisms producers of biomolecules with therapeutic potential and, among such fungi, we can highlight the genera Aspergillus and Penicillium. Such genres are also known as produce enzymes of biotechnological interest, such as proteases, which are used in different segments of the industry. Thus, the study aimed to evaluate the antimicrobial and proteolytic potential of filamentous fungi stored in the Collection of Amazon Fungi - CFAM, as well as characterize the chemical profile of fungi with best activities. One hundred fungal cultures were selected, being 50 of Aspergillus spp. and 50 of Penicillium spp., stored in the Amazon Fungi Collection – CFAM of the ILMD/FIOCRUZ. The reactivation of cultures was carried out according to the literature specialized. To obtain the extracts, viable cultures were cultivated in Agar Yeast and Sucrose Extract (YES), at 28°C and, after seven days, cold extraction was performed of biocompounds in Ethyl Acetate. The extracted biocompounds were tested in front Candida albicans CFAM 1286, Staphylococcus aureus CBAM 0324 and Escherichia coli CBAM 0002, by the "cup plate" method and the Minimum and Inhibitory Concentration was performed (CIM). The extracts that showed activity were subjected to CIM and those that presented the lowest concentrations in this (0.156 and 0.312 mg/mL) followed by the characterization of the chemical profile by Thin Layer Chromatography (TLC) and respective physical (with UV light of 254 and 365 nm), chemical (using Dragendorf, Anisaldehyde, Ferric Chloride, Ceric Sulfate and NP/PEG) and biological (bioautography with E. coli 0002, S. aureus 0324 and C. albicans 1286) and they were also evaluated for their proteolytic production where the fungal fragments were cultivated in manachini solution for 5 days at 28°C, where the tests on "Cup plate" and reading of enzyme production through the spectrophotometer. Among the extracts obtained from the 100 selected fungal cultures, 64% (n=64) of the extracts showed positive activity for at least one microorganism tested with inhibition halos ranging from 2 to 30 mm in diameter. At CIM, of the 64 extracts that showed activity, 24% (n=15) showed activity at the lowest concentrations of the study (0.156 and 0.312 mg/mL) and these went to the CCD, where it was possible to notice a wide variety of compounds found. Of the 15 fungi, five were lost by contamination, with only ten being used for enzyme production. In the tests of "Cup plate", only one fungal filtrate did not show activity. The studied fungi showed satisfactory activity both for antimicrobials and for the production of proteases, contributing to the better characterization of the fungal species in the region Amazon, specifically the genera Aspergillus and Penicillium, as well as for the advance in the biotechnology sector. The fungal extracts studied showed results promising, however future tests are needed to better elucidate the compounds. KEYWORDS: Antimicrobial; enzymes; chemical compounds. |
URI: | http://repositorioinstitucional.uea.edu.br//handle/riuea/3658 |
Appears in Collections: | ENS - Trabalho de Conclusão de Curso de Graduação |
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