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Use este identificador para citar ou linkar para este item: http://repositorioinstitucional.uea.edu.br//handle/riuea/2296
Título: Efeitos da autoproteólise e de fatores físico-químicos nas atividades biológicas e antigenicidade das toxinas do veneno da serpente amazônica Bothrops atrox (Linnaeus, 1758) “JARARACA”.
Autor(es): Silva, Rebecca Tavares e
Orientador(es): López-Lozano , Jorge Luis
Palavras-chave: Bothrops atrox;autoproteólise;fatores físico-químicos;toxicidade;soro hiperimune experimental;vacina antibotrópica
Data do documento: 4-Jul-2009
Editor: Universidade do Estado do Amazonas
Resumo: Na Amazônia Brasileira a serpente peçonhenta Bothrops atrox (Viperidae) é responsável por 90% dos acidentes ofídicos. Seu veneno possui atividades anticoagulante, proteolítica e hemorrágica (local e sistêmica). A proteólise e fatores físico-químicos (mudanças de pH, temperatura, composição do solvente) e o tempo de ação do agente, podem afetar a estrutura tridimensional/estado conformacional nativo de uma proteína, o que poderia levar ao surgimento de proteínas e peptídeos com atividades biológicas e antigenicidade diferentes da proteína de origem. Na literatura revisada não foram encontradas informações a cerca destas influências sobre as atividades biológicas e antigenicidade das toxinas do veneno de B. atrox. Devido a isso, o presente trabalho prestou a avaliar as atividades biológicas e a antigenicidade das toxinas do veneno após autoproteólise a 37ºC por até uma semana, em diferentes soluções tampão (PBS - 100 mM, pH 7,2 e COLAGENASE - Tris 50 mM, pH 7,5). Os resultados demonstraram que os perfis moleculares, as atividades biológicas e a antigenicidade das toxinas do veneno de B. atrox autoproteolisado segundo o tempo de incubação foram intensamente influenciados pelos constituintes das soluções tampão utilizadas no processo experimental. Brij 35, constituinte do tampão COLAGENASE, protegeu principalmente da degradação proteolítica e congelamento-descongelamento, as metaloproteinases da classe P-I (23 kDa) e P-III (50 kDa) do veneno, preservando a estrutura/função biológica delas, influenciando dessa forma na elevada atividade hemorrágica, toxicidade e letalidade do veneno. O veneno de B. atrox autoproteolisado em tampão PBS obteve decréssimo quantitativo do total de toxinas conforme verificado no perfil molecular, e a rápida degradação das metaloproteinases hemorrágicas da classe P-III, durante o tempo de incubação a 37°C, causa grande decréssimo das atividades hemorrágica, proteolítica, edematogênica e letal. O soro hiperimune experimental obtido usandose como antígeno a amostra do veneno de B. atrox autoproteolisado por uma semana a 37°C em tampão PBS apresenta satisfatória eficácia neutralizante das atividades hemorrágica, proteolítica e letal contra o veneno in natura de B. atrox, e também baixa toxicidade no processo de imunização de animais de laboratório. Os resultados sugerem a purificação de peptídeos/proteínas atóxicas do veneno de B. atrox proteolisado a 37°C por suas próprias proteases por uma semana em tampão PBS (100 mM), pH 7,2 avaliando sua atividade antigênica gerando subsídios para produção de vacina/soro antibotrópico específico contra o veneno da serpente amazônica B. atrox.
Abstract: In Brazilian Amazonian rain forest venomous snake Bothrops atrox (Viperidae) are responsible for 90% of snakebites. Its venom has anticoagulant, proteolytic and hemorrhagic (local and systemic) biological activities. Proteolysis and physicochemical factors (pH changes, temperature, composition of solvent) and the time of the agent's action can affect the three-dimensional structure/conformational state of a native protein, which could lead to the emergence of proteins and peptides with different biological activities and antigenic properties when comparational with original protein. Literature review found no information about these influences on the biological activities and antigenicity of toxins from venom of B. atrox venom. Because of this, this work provided to evaluate the biological activities and antigenicity of toxins from the venom after autoproteolysis at 37°C in different buffer solutions (PBS - 100 mM, pH 7.2 and COLLAGENASE, 50 mM Tris, pH 7.5) incubation time was until one week. The results showed that the molecular profiles, the biological activities and antigenicity of toxins from B. atrox autoproteolisysed second incubation time were strongly influenced by the constituents of the buffer solutions used in the experimental process. Brij 35, a constituent of the buffer COLLAGENASE, protected mainly from proteolytic degradation and freeze-thaw, the PI class metalloproteinase (23 kDa) and P-III (50 kDa) of the venom, preserving the structure / biological function of them, thus influencing the high hemorrhagic activity, toxicity and lethality of the venom. The venom of B. atrox autoproteolysed in PBS showed decay total amount of the toxin as seen in the molecular profiles, and rapid degradation of hemorrhagic metalloproteinase-class P-III, during the time of incubation at 37°C, causes higher decay hemorrhagic, proteolytic, edema and lethal activities. The experimental hyperimmune serum obtained by using as antigen a sample of B. atrox venom autoproteolysed for a week at 37°C in PBS showed satisfactory efficacy neutralizing activity of hemorrhagic, proteolytic and lethal activities from in natura B. atrox venom, and also low toxicity in the process of immunization of laboratory animals. The results suggest the purification of non-toxic peptides/proteins from B. atrox venom proteolysis at 37°C by their own proteases for a week in PBS buffer (100 mM), pH 7.2 evaluating its antigenic activity generating subsidies for vaccine production / specific antivenom against the venom of the Amazonian snake B. atrox.
URI: http://repositorioinstitucional.uea.edu.br//handle/riuea/2296
Aparece nas coleções:DISSERTAÇÃO - MBT Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Recursos Naturais da Amazônia



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