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http://repositorioinstitucional.uea.edu.br//handle/riuea/2422
Título: | Prospecção, caracterização e purificação de lipase microbiana |
Autor(es): | Gama, Auricelia Matos da |
Orientador(es): | Yamane, Tetsuo |
Palavras-chave: | lipases extracelulares;fungos filamentosos;fermentação submersa;purificação |
Data do documento: | 23-Jun-2012 |
Editor: | Universidade do Estado do Amazonas |
Resumo: | As lipases são enzimas que catalisam a síntese e a hidrólise de triacilglicerídeos em glicerídeos e ácidos graxos. Sua utilização como catalisador biológico tem tomado vários aplicações na indústria farmacêutica e alimentar. Sua fonte pode ser tanto de origem animal, vegetal e microbiológica. Com grande destaque para a última devido às vantagens como forma de obtenção, manuseio e grande diversidade, o que torna os fungos filamentosos uma ampla fonte de lipases. A busca por novas fontes proporciona vários trabalhos com objetivos específicos. Assim o objetivo do trabalho foi selecionar e avaliar dentre duas coleções de fungos filamentosos, possíveis produtores de lipases. Para este estudo, 316 isolados foram efetivamente testados quanto à atividade lipolítica em meio de cultura líquido indutor de lipase (óleo de oliva). Desse total, 298 (94%) apresentaram-se lipase positivos e suas atividade verificada a partir da reação de hidrólise com o substrato p-NPP com leitura no espectrofotômetro a 410 nm. Como forma de seleção, apenas os isolados que apresentaram atividade acima de 7000 U/ml foram selecionados. Com isso, somente seis isolados apresentaram atividades consideradas boas e foram submetidas a novos ensaios com a atividade enzimática em óleo de dendê. A cepa mais promissora foi identificada através de técnicas moleculares como Endomelanconiopsis endophytica, produzindo uma atividade de 7895 U/mL para o óleo de oliva e 10727 U/mL para o óleo de dendê. O extrato bruto foi então purificado através da cromatografia de troca iônica, resultando em três enzimas de forma ativa (duas de 60 e uma de 46 kDa) quantificada em SDS-PAGE. E suas identidades verificadas através do espectro de massa e do sequenciamento do N-terminal, pela degradação de Edmann. Duas delas apresentaram-se bloqueadas e a de 46 kDa foi obtida sua sequência. Assim o estudo procurou contribuir para a descoberta de novas lipases com o potencial biotecnológico, contribuindo para um futuro banco de dados protéico. Palavras-chave: lipases extracelulares, fungos filamentosos, fermentação submersa; purificação |
Abstract: | Lipases are enzymes which catalyze the synthesis and hydrolysis of glycerides in triacylglycerols and fatty acids. Its use as a biological catalyst has taken various applications in the pharmaceutical and food industries. Your source may be either animal, plant and microbial. With great emphasis on the latter due to the advantages as a means of obtaining, handling and great diversity, which makes filamentous fungi an interesting source of lipases. The search for new sources provides several jobs with specific objectives. Thus the aim of this study was to evaluate and select among two collections of filamentous fungi, potential producers of lipases. For this study, 316 strains were actually tested for lipolytic activity in liquid culture medium inducing lipase (olive oil). Of this total, 298 (94%) were positive and their lipase activity observed from the hydrolysis reaction with the substrate p-NPP with reading in the spectrophotometer at 410 nm. Only isolates exhibiting activity above 7000 U / ml were selected. Thus, only six isolates showed activities considered good and underwent further testing with enzyme activity in palm oil. The most promising strain was identified through molecular techniques as Endomelanconiopsis endophytica, producing an activity of 7895 U/mL for the olive oil and 10,727 U/mL for palm oil. The crude extract was then purified by ion exchange chromatography, resulting in three enzymes active form (two of 60 and one of 46 kDa) quantified by SDS-PAGE. And their identity verified by mass spectral and N-terminal sequencing by Edmann degradation. Two of them were presented blocked and the 46 kDa its sequence was obtained. Thus the study sought to contribute to the discovery of new lipases with biotechnological potential, contributing to a future database protein. Keywords: lipases, filamentous fungi, submerged fermentation, purification |
URI: | http://repositorioinstitucional.uea.edu.br//handle/riuea/2422 |
Aparece nas coleções: | DISSERTAÇÃO - MBT Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Recursos Naturais da Amazônia |
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