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Título: Caracterização parcial de proteases produzidas por espécies de Penicillium
Título(s) alternativo(s): Partial characterization of proteases produced by Penicillium species
Autor(es): Brito, Ana Kezia Pimentel de
Palavras-chave: Enzimas;Enzymes;Biocatalizadores;Biocatalysts;Penicillium spp;Penicillium spp
Data do documento: 5-Jul-2018
Editor: Universidade do Estado do Amazonas
Citação: BRITO, Ana Kezia Pimentel de. Caracterização parcial de proteases produzidas por espécies de Penicillium. 2018. 32 f. TCC (Graduação em Ciências Biológicas) - Universidade do Estado do Amazonas, Manaus.
Abstract: In world use of enzymes the proteases are highlighted, corresponding to 60% of the total of biocatalysts sold in the world applied in diversified industries. Most of the proteases commercialized are derived from filamentous fungi, however, although several studies point to the production of these enzymes from Penicillium species, little is known about the partial characterization of proteases of species from the Amazon region. The objective of this work was to evaluate the potential of the proteolytic enzymes that present specific characteristics obtained from the crude extract of P. fellutanum CFAM 60, Penicillium sp. CFAM 91 and P. citrinum CFAM 233, yielded by the Fungi Collection of the Amazon-CFAM / FIOCRUZAM, produced by submerged fermentation. The species were cultivated in Czapek Yeast Extract Agar in Petri dishes, maintaining the cultures at 25 ° C for seven days. From the cultures obtained, 3 mycelial discs were removed to be inoculated in 50mL MGYP [(glucose + peptone + yeast extract, pH 6.0). The fermentation in liquid medium was under the stirring and stationary condition, incubated at 30ºC, 150rpm And the enzyme activity was determined by the enzymatic activity of the extracts and the enzyme activity of the enzyme, and the enzyme activity was determined by the enzymatic activity for all extracts, being the highest value 43.13 U / mL, in the extracts obtained from P. citrinum CFAM 233, and the lowest value 34.17 U / mL of Penicillium sp. CFAM 91. In the extracts obtained by stationary culture, the species that presented the best enzymatic activity, in the value of 34.22 U / mL, was P. fellutanum CFAM 60, and the lowest activity, 11.24 U / mL, was P. citrinum CFAM 233. For the partial characterization of enzyme, the species of P. citrinum CFAM 233 was selected and it was observed that pH and temperature of the proteases were pH 6.0 and 50, respectively. When subjected to the stability test, the enzyme remained stable at pH 6.0-10.0, with 100% activity and 25-30ºC. Thus, it can be concluded that P. citrinum CFAM 233 presents better protease production and, when subjected to fermentation under agitation, these enzymes have acid characteristics and affinity at high temperature, inferring their application in the food industry.
Descrição: No uso mundial de enzimas as proteases estão em destaque, correspondendo a 60% do total de biocatalisadores comercializados no mundo aplicadas em industrias diversificadas. Grande parte das proteases comercializadas são proveniente de fungos filamentosos, no entanto apesar de diversas pesquisas apontarem para a produção destas enzimas a partir de espécies de Penicillium, pouco se sabe sobre a caracterização parcial de proteases de espécies da região Amazônica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a potencialidade das enzimas proteolíticas que apresentem características específicas obtidas do extrato bruto de P. fellutanum CFAM 60, Penicillium sp. CFAM 91 e P. citrinum CFAM 233, cedidos pela Coleção de Fungos da Amazônia-CFAM/FIOCRUZ – AM, produzidos por fermentação submersa. As espécies foram cultivadas em Ágar Extrato de Levedura Czapek, em placa de Petri, mantendo os cultivos a 25oC, durante sete dias. Dos cultivos obtidos foram retirados 03 discos miceliais para serem inoculados em 50mL de MGYP [(glicose + peptona + extrato de levedura, pH 6,0]. A fermentação em meio líquido foi sob a condição de agitação e estacionária, incubados a 30ºC, 150rpm. Após cinco dias o extrato foi filtrado a vácuo. Para a determinação da atividade das proteases utilizou-se 150μL do extrato e 250μL de azocaseína em tampão Tris- HCl, pH 7,2, realizando a leitura a 440nm. A atividade proteolítica foi determinada para todos os extratos, sendo de maior valor 43,13 U/mL, nos extratos obtidos de P. citrinum CFAM 233, e o menor valor 34,17 U/mL de Penicillium sp. CFAM 91. Nos extratos obtidos por cultivo estacionário, a espécie que apresentou melhor atividade enzimática, no valor de 34,22 U/mL, foi P. fellutanum CFAM 60, e a menor atividade, 11,24 U/mL, foi o P. citrinum CFAM 233. Para a caracterização parcial da enzima, foi selecionada a espécie de P. citrinum CFAM 233 e observou-se que o pH e temperatura ótimos das proteases foram em pH 6,0 e 50ºC, respectivamente. Ao ser submetida ao teste de estabilidade, a enzima manteve-se estável do pH 6.0-10.0, com 100% de atividade e de 25 a 30ºC. Assim pode-se concluir que P. citrinum CFAM 233 apresenta melhor produção proteases e, quando submetido a fermentação sob agitação, tais enzimas têm característica ácida e afinidade em temperatura elevada, inferindo sua aplicação na indústria de alimentos.
URI: http://repositorioinstitucional.uea.edu.br//handle/riuea/1539
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